Descrição

Desde sua origem, a humanidade convive com a imagem da serpente, que geralmente é considerada um inimigo natural. Freqüentemente associada a entidades maléficas por religiões e folclores, assim como a personagem bíblica que induziu o homem ao pecado original, a serpente parece nunca ter sido vista com bons olhos. Com certeza, grande parte de sua fama é decorrente das propriedades de seus venenos, visto que estas podem interferir bruscamente no equilíbrio de um organismo, provocando graves efeitos tóxicos e, em muitos casos, a morte. Porém, tal qual um jogo de forças em uma balança, se forem usadas no momento certo e na quantidade adequada, substâncias tóxicas passam a manifestar efeitos terapêuticos que tendem a reconduzir o organismo a um estado de equilíbrio. Por exemplo, uma substância anticoagulante pode provocar um efeito dramático em um hemofílico, mas pode salvar a vida de pessoas com predisposição à trombose e obstrução de vasos sanguíneos.

A biodiversidade brasileira propicia uma valiosa oportunidade de explorar moléculas farmacologicamente ativas, possibilitando o acesso a soluções para patologias. As peçonhas das serpentes representam uma rica fonte de compostos ativos, sendo que alguns destes já foram utilizados como protótipos no desenvolvimento de novos medicamentos. Este livro é dirigido a pesquisadores interessados em buscar novas respostas a perguntas antigas, utilizando, para isso, toxinas de venenos de serpentes como ferramentas de trabalho.

Prefácio – 7

Parte I - Purificação e caracterização de toxinas – 9
1. Métodos cromatográficos e critérios de pureza – 11
2. Seqüenciamento N-terminal de proteínas – 25

Parte II - Caracterização biológica – 43
3. Caracterização da atividade proteolítica de toxinas e uso de inibidores – 45
4. Atividade fosfolipásica de toxinas – 53
5. Atividade L-aminoácido oxidase de venenos de serpentes – 57
6. Venenos de serpentes e suas ações nos mecanismos de coagulação e fibrinólise – 61
7. Técnicas básicas de cultura celular – 79
8. Ensaios para estudo dos efeitos das toxinas sobre a adesão celular – 87
9. Ensaios para estudo dos efeitos das toxinas sobre a proliferação celular – 97
10. Ensaios para estudo dos efeitos das toxinas sobre a agregação plaquetária – 105
11. Atividade hemorrágica de toxinas – 115
12. Determinação da atividade miotóxica – 119

Parte III - Clonagem e expressão de toxinas recombinantes – 123
13. Desenho de oligonucleotídeos iniciadores, PCR, RT-PCR e PCR em tempo real – 125
14. Isolamento e análise de RNA – 139
15. Construção de bibliotecas de cDNA – 153
16. Caracterização de cDNA – 165
17. Subclonagem nos vetores de expressão e transformação – 171
18. Produção de proteínas recombinantes em sistemas heterólogos – 179
19. Ensaios de solubilidade e enovelamento (Folding) – 191
20. Purificação de proteínas recombinantes por cromatografia de afinidade – 199
21. Reenovelamento e renaturação de toxinas in vitro – 213

Parte IV - Estudos estruturais – 219
22. Análise da estrutura primária de toxinas – 221
23. Técnicas de cristalização de proteínas - cuidados com as amostras – 231
24. Predições estruturais com base em homologia – 241

Sobre os autores – 255

Organizadoras: Heloisa Sobreiro Selistre-de-Araújo e Dulce Helena Ferreira de Souza
Ano: 2007
Número de Páginas: 258
Tamanho: 16 x 23 cm
Editora: EdUFSCar
Acabamento: Brochura
ISBN: 978-85-7600-090-7