Descrição

A eletroforese é uma técnica amplamente usada nos laboratórios de bioquímica, biotecnologia e genética molecular. Em face à carência de literatura em língua nacional, esta obra visa fornecer ao leitor os fundamentos básicos e as aplicações práticas das diferentes técnicas eletroforéticas, com ênfase na análise de isoenzimas, poliptídeos, proteínas afins e ácidos nucléicos, como marcadores aplicados ao estudo de Genética e Bioquímica de Microrganismos e Plantas.

Os seis capítulos iniciais, descritos na forma de livro-texto, fornecem ao leitor os princípios fundamentais e os métodos de eletroforese e extração de proteínas a partir de tecidos de plantas, de fungos, de bactérias e de nematóides, bem como os fundamentos e as receitas para a revelação, em géis, de proteínas totais e de 87 enzimas específicas. Os demais capítulos, também escritos por um seleto grupo de especialistas do país e do exterior, descrevem, na forma de revisão, a interpretação e a análise de dados eletroforéticos e suas aplicações como marcadores bioquímicos na taxonomia e na genética de plantas, fungos, bactérias, nematóides, vírus e viróides. Em face dos avanços da pesquisa na área de Bioquímica de Proteínas, há também dois capítulos sobre "Análise proteômica", como ferramenta auxiliar à genômica funcional.

Este livro, ilustrado com esquemas e fotos originais de alta resolução, é indispensável aos estudantes de graduação e pós-graduação nas áreas de fitopatologia, bioquímica, biotecnologia, genética e melhoramento de plantas e microrganismos para fins científicos e, ou industriais.

1. Modalidades da Eletroforese
Walter Brune e Acelino Couto Alfenas

1. FUNDAMENTOS TEÓRICOS – 25
1.1. MIGRAÇÕES IÔNICAS – 26
1.2. ELETROENDOSMOSE – 34
2. FUNDAMENTOS PRÁTICOS – 36
2.1. CORRENTE ELÉTRICA – 36
2.2. SUPORTES DA ELETROFORESE – 37
2.3. POROSIDADE DE GÉIS – 38
2.4. MOBILIDADE DOS ÍONS – 40
2.5. COBERTURAS – 42
2.6. REMOÇÃO DE SDS – 43
2.7. “BLOTTING” – 43
3. MODALIDADES E VARIAÇÕES DA TÉCNICA DE ELETROFORESE – 47
3.1. ELETROFORESE DESCONTÍNUA (DISC-ELETROFORESE) – 47
3.2. ISOFOCUSSÃO (IEF) – 50
3.2.1. COM ANFOLINAS – 50
3.2.2. COM IMOBILINAS – 53
3.3. ELETROFORESE BIDIMENSIONAL (2D-E) – 54
3.4. ISOTACOFORESE (ITF) – 58
3.5. ELETROFORESE REVERSA (R-PAGE) – 61
3.6. IMUNOTÉCNICAS – 62
3.6.1. IMUNODIFUSÃO – 62
3.6.2. "IMMUNOBLOTTING" – 63
3.6.3. IMUNOELETROFORESE – 64
3.6.4. AVALIAÇÃO QUANTITATIVA DE ATG – 66
3.6.5. IMUNOELETROFOCUSSÃO – 67
3.6.6. IMUNOELETROFORESE BIDIMENSIONAL – 67
3.6.7. IMUNOELETROFORESE CRUZADA – 68
3.6.8. IMUNOELETROFORESE ACOPLADA – 68
3.7. AFINO-ELETROFORESE – 70
3.8. ELETROFORESE CAPILAR (EC) – 70
4. REFERÊNCIAS – 76

2. Extração de Proteínas para Eletroforese
Acelino Couto Alfenas, Walter Brune, José Rogério de Oliveira, Sandra Kunieda de Alonso e Marco Scortichini

1. EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DE PLANTAS – 85
1.1. FUNDAMENTOS – 85
1.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 88
1.2.1. ENZIMAS DE SEMENTES – 88
1.2.2. ENZIMAS DE FOLHAS (ANGIOSPERMAS) E ACÍCULAS (GIMNOSPERMAS) – 92
1.2.3. ENZIMAS DE PÓLEN – 95
1.2.4. ENZIMAS DE MICROCULTURA – 95
2. EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DE FUNGOS – 98
2.1. FUNDAMENTOS – 98
2.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 100
2.2.1. CULTIVO, COLETA DE MICÉLIO E EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS – 100
2.2.2. DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS NAS AMOSTRAS – 103
3. EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DE BACTÉRIAS – 105
3.1. FUNDAMENTOS – 105
3.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 106
3.2.1. CULTIVO DE BACTÉRIA – 106
3.2.2. EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS – 107
4. EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DE NEMATÓIDES – 111
4.1. FUNDAMENTOS – 111
4.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 111
5. REFERÊNCIAS – 113

3. Eletroforese em Gel de Amido
Acelino Couto Alfenas e Walter Brune

1. FUNDAMENTOS – 115
2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 130
2.1. PREPARO DO GEL – 130
2.2. APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS E ELETROFORESE – 137
2.3. PROBLEMAS NO PREPARO DO GEL E DURANTE A ELETROFORESE – 138
2.4. CORTE DO GEL EM FATIAS – 138
2.5. REVELAÇÃO DE PROTEÍNAS EM GÉIS – 142
2.6. SECAGEM DO GEL – 142
2.6.1. MÉTODO DO BASTIDOR – 143
2.6.2. MÉTODO DA PLACA DE VIDRO – 144
3. DOCUMENTAÇÃO DE RESULTADOS EM GEL – 145
3.1. FOTOGRAFIA CONVENCIONAL – 145
3.2. FOTOGRAFIA DIGITAL – 146
4. REFERÊNCIAS – 148

4. Eletroforese em Gel de Poliacrilamida
Acelino Couto Alfenas e Walter Brune

1. FUNDAMENTOS – 151
1.1. SISTEMAS DE ELETROFORESE – 154
1.1.1. ELETROFORESE CONTÍNUA – 155
1.1.2. ELETROFORESE DESCONTÍNUA – 157
1.1.3. ELETROFORESE DESCONTÍNUA COM SDS (SDS-PAGE) – 161
2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 162
2.1. PREPARO DAS AMOSTRAS – 162
2.2. MATERIAL – 162
2.3. SOLUÇÕES – 163
2.3.1. COMPONENTES ACRÍLICOS – 163
2.3.2. TAMPÃO DO GEL SEPARADOR OU DE CORRIDA – 164
2.3.3. TAMPÃO DO GEL EMPILHADOR – 164
2.3.4. TAMPÃO DO TANQUE (ELETRODO) – 164
2.3.5. SOLUÇÃO-ESTOQUE DE SDS – 165
2.3.6. TAMPÃO DA AMOSTRA – 165
2.3.7. PERSULFATO DE AMÓNIO 10% – 165
2.4. PREPARO DO GEL – 166
2.4.1. SISTEMA PAGE – 166
2.4.2. SISTEMA SDS-PAGE – 170
2.4.3. GÉIS COM GRADIENTE DE CONCENTRAÇÃO (T%) DE ACRILAMIDA – 170
2.5. APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS E ELETROFORESE – 172
2.6. PROBLEMAS NO PREPARO DO GEL E DURANTE A ELETROFORESE – 172
2.7. REVELAÇÃO, FOTOARQUIVAMENTO E SECAGEM DE GÉIS – 173
2.8. RECRISTALIZAÇÃO DE ACRILAMIDA E BIS – 180
2.8.1. RECRISTALIZAÇÃO DE ACRILAMIDA – 181
2.8.2. RECRISTALIZAÇÃO DE BIS – 181
3. REFERÊNCIAS – 182

5. Identificação de Proteínas em Géis
Walter Brune e Acelino Couto Alfenas

1. REVELAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS – 183
1.1. REVELAÇÃO POR AZUL-BRILHANTE-DE-COOMASSIE – 183
1.2. REVELAÇÃO POR ÍONS DE PRATA – 184
1.2.1. SOLUÇÕES PARA COLORAÇÃO PELO MÉTODO DA PRATA – 185
1.2.2. REVELAÇÃO – 186
1.3. REVELAÇÃO POR OURO OU PRATA COLOIDAIS – 187
1.4. REVELAÇÃO EM GÉIS DE AMIDO – 188
1.4.1. PRETO DE NAFTALENO – 188
1.4.2. NIGROSINA – 188
1.4.3. BENZIDINA (para hemoglobina) – 189
2. REVELAÇÃO DE GLICOPROTEÍNAS – 189
2.1. PREPARO DA SOLUÇÃO DE SCHIFF – 189
2.2. COLORAÇÃO – 189
3. REVELAÇÃO DE LIPOPROTEÍNAS – 189
3.1. REVELAÇÃO COM “Stains-All” – 190
4. REVELAÇÃO DE FOSFOPROTEÍNAS – 190
4.1. REAÇÃO COM VERDE-METILA E MOLIBDATO – 190
5. REVELAÇÃO DE ÍONS INORGÂNICOS – 191
5.1. REVELAÇÃO EM TIRAS DE ACETATO DE CELULOSE – 191
6. REVELAÇÃO DE ENZIMAS – 191
6.1. TÉCNICA DE “COBERTURA” – 192
6.2. SISTEMA AMIDO-IODO – 192
6.3. OXIDORREDUÇÕES – 192
6.4. SAIS DE TETRAZÓLIO – 194
6.5. AZOACOPLAMENTOS – 195
6.6. REVELAÇÃO POR FLUORESCÊNCIA – 196
7. REFERÊNCIAS – 197

6. Identificações Específicas de Enzimas em Géis
Walter Brune, Acelino Couto Alfenas e Tatiana Góes Junghans

1. FUNDAMENTOS – 201
2. ANÁLISES ESPECÍFICAS – 209
2.1. ACETIL HEXOSAMINIDASE (HA) – 209
2.2. ACONITASE (ACO) – 211
2.3. ADENILATO CINASE (ADK) – 212
2.4. ADENOSINA 5’-TRIFOSFATASE – 214
2.5. ALANINA DESIDROGENASE (ALDH) – 215
2.6. ÁLCOOL DESIDROGENASE (ADH) – 216
2.7. ALDEÍDO OXIDASE (AO) – 216
2.8. ALDOLASE (ALD) – 217
2.9. a-AMILASE (a-AM) – 219
2.10. b-AMILASE (b-AM) – 219
2.11. ANIDRASE CARBÔNICA (CA) – 220
2.12. ARGININOSSUCCINATO LIASE – 221
2.13. ARIL SULFATASE – 222
2.14. ASCORBATO OXIDASE – 223
2.15. CARBOXIPEPTIDASE A – 224
2.16. CARBOXIPEPTIDASE B – 225
2.17. CATALASE (CAT) – 226
2.18. CELULASE – 228
2.19. COLINESTERASE – 229
2.20. DIAFORASE (DIA) – 229
2.21. ENZIMA MÁLICA (ME) – 231
2.22. ESTERASE (EST) – 233
2.23. FOSFATASE ÁCIDA (ACP) – 234
2.24. FOSFATASE ALCALINA (AKP) – 235
2.25. FOSFOENOLPIRUVATO CARBOXILASE – 236
2.26. FOSFOGLUCO MUTASE (PGM) – 237
2.27. 6-FOSFOGLUCONATO DESIDROGENASE (PGDH) – 239
2.28. FOSFOMANOSE ISOMERASE (PMI) – 239
2.29. FOSFORILASE – 240
2.30. FUCOSIDASE – 241
2.31. FUMARASE (FUM) – 242
2.32. FOSFOGLUCO ISOMERASE (PGI) – 243
2.33. b-GALACTOSE DESIDROGENASE (GLDH) – 243
2.34. a-GALACTOSIDASE – 244
2.35. b-D-GALACTOSIDASE – 245
2.36. GLICERALDEÍDO-3-FOSFATO DESIDROGENASE (GAPDH) – 245
2.37. GLICERATO-2-DESIDROGENASE (G2D) – 246
2.38. GLICERO-3-FOSFATO-DESIDROGENASE – 247
2.39. GLUCOSE DESIDROGENASE (GDH) – 248
2.40. GLUCOSE-6-FOSFATASE – 249
2.41. GLUCOSE OXIDASE (GOD) – 250
2.42. GLUCOSE-6-FOSFATO DESIDROGENASE (G6PDH) – 251
2.43. a-GLUCOSIDASE (a-GLU) – 251
2.44. b-D-GLUCOSIDASE (b-GLU) – 252
2.45. b-GLUCURONIDASE – 253
2.46. GLUTAMATO DESIDROGENASE (GTDH) – 253
2.47. GLUTAMATO-OXALOACETATO TRANSAMINASE (GOT) – 254
2.48. GLUTAMATO-PIRUVATO TRANSAMINASE (GPT) – 255
2.49. D-GLUTAMATO RACEMASE – 256
2.50. GLUTAMINA SINTETASE – 257
2.51. GLUTATIONA REDUTASE – 258
2.52. HEXOCINASE (HK) – 260
2.53. INDOLACETATO OXIDASE (IAA-OXIDASE) – 261
2.54. ISOCITRATO DESIDROGENASE (IDH) – 262
2.55. LACTATO DESIDROGENASE (LDH) – 263
2.56. LEUCINA AMINOPEPTIDASE (LAP) – 265
2.57. LIPASE – 266
2.58. LIPOXIGENASE (LOX) – 267
2.59. LISOZIMA – 269
2.60. MALATO DESIDROGENASE (MDH) – 270
2.61. MENADIONA REDUTASE (MR) – 271
2.62. NADH-DESIDROGENASE – 272
2.63. NADPH-DESIDROGENASE – 272
2.64. NITRATO REDUTASE – 273
2.65. PAPAÍNA – 275
2.66. PEPTIDASES – 276
2.67. PEPTIDASE P – 277
2.68. PEROXIDASE (PO) – 278
2.69. PIROFOSFATASE – 280
2.70. PIRUVATO CINASE (PK) – 281
2.71. POLIFENOLOXIDASE (PPO) – 284
2.72. PROTEINASES – 285
2.73. QUIMOTRIPSINA – 286
2.74. QUITINASE – 286
2.75. RIBONUCLEASE – 288
2.76. SORBITOL DESIDROGENASE (SDH) – 289
2.77. SUCCINATO DESIDROGENASE (SCDH) – 290
2.78. SUPERÓXIDO DISMUTASE (SOD) – 291
2.79. TIOGLUCOSIDASE – 292
2.80. TRIOSEFOSFATO ISOMERASE (TPI) – 294
2.81. TRIPSINA – 295
2.82. UREASE – 296
2.83. URIDINA-5-DIFOSFOGLUCOSE PIROFOSFORILASE (UGPP) – 297
2.84. XANTINA DESIDROGENASE (XDH) – 298
2.85. XILANASE (EX) – 299
2.86. b-XILOSIDASE – 300
2.87. XIQUIMATO DESIDROGENASE (SKDH) – 301
3. REFERÊNCIAS – 302
APÊNDICE A – 312
APÊNDICE B – 317

7. Aloenzimas na Genética de Populações de Plantas
Ingrid Peters Robinson

1. MARCADORES GENÉTICOS – 329
2. METODOLOGIA – 331
3. VANTAGENS DO USO DE ISOENZIMAS – 334
4. LIMITAÇÕES DO USO DE ISOENZIMAS – 336
5. A EVOLUÇÃO DO POLIMORFISMO NAS ENZIMAS – 339
6. COMPARAÇÃO COM OUTROS TIPOS DE MARCADORES GENÉTICOS – 343
7. ESTRUTURA GENÉTICA DE POPULAÇÕES – 345
7.1. VARIAÇÃO NO TAMANHO EFETIVO DE POPULAÇÃO – 346
7.2. MODO DE REPRODUÇÃO E SISTEMAS DE CRUZAMENTO – 350
7.3. VARIÁVEIS AMBIENTAIS E SELEÇÃO – 355
8. MEDIDAS DE VARIABILIDADE E DE ESTRUTURA GENÉTICA EM POPULAÇÕES – 358
8.1. A ESTATÍSTICA F, DE SEWALL WRIGHT – 358
8.2. A MEDIDA Gst, DE DIFERENCIAÇÃO GENÉTICA – 362
8.3. O MÉTODO DA AUTOCORRELAÇÃO – 365
9. REFERÊNCIAS – 368

8. Variância de Freqüências Alélicas
Luiz Antônio dos Santos Dias

1. INTRODUÇÃO – 381
2. FUNDAMENTOS – 382
3. ANÁLISE DE VARIÂNCIA – 384
3.1. MODELO HIERÁRQUICO BALANCEADO – 384
3.2. MODELO HIERÁRQUICO DESBALANCEADO – 385
3.3. COMPONENTES DE VARIÂNCIA – 389
4. APLICAÇÃO – 393
4.1. ANÁLISE COM UM ÚNICO ALELO – 394
4.2. ANÁLISE COM VÁRIOS ALELOS – 398
5. AVANÇOS NA ANÁLISE DE VARIÂNCIA – 402
6. REFERÊNCIAS – 403

9. Análises Multidimensionais
Luiz Antônio dos Santos Dias

1. INTRODUÇÃO – 405
2. ANÁLISE DE AGRUPAMENTO – 407
2.1. MEDIDAS DE DISSIMILARIDADE – 408
2.1.1. DISTÂNCIA EUCLIDIANA – 409
2.1.2. DISTÂNCIA ANGULAR – 413
2.2. MEDIDAS DE DISTÂNCIA GENÉTICA – 416
2.2.1. DISTÂNCIA DE NEI – 417
2.2.2. DISTÂNCIA DE ROGERS – 420
2.3. COEFICIENTES DE SIMILARIDADE – 422
2.3.1. COEFICIENTE DE JACCARD (Sj) – 423
2.3.2. COEFICIENTE DE NEI E LI (Snl) – 423
2.3.3. COEFICIENTE DE CONCORDÂNCIA SIMPLES (Scs) – 423
2.4. ESCOLHA DO COEFICIENTE APROPRIADO – 426
2.5. MÉTODOS DE AGRUPAMENTO – 427
2.5.1. VIZINHO MAIS PRÓXIMO – 428
2.5.2. VIZINHO MAIS DISTANTE – 433
2.5.3. MÉDIAS DAS DISTÂNCIAS – 437
2.6. ESCOLHA E AVALIAÇÃO DO MÉTODO DE AGRUPAMENTO – 441
3. ANÁLISE DE COMPONENTES PRINCIPAIS (PCA) – 445
3.1. PRINCÍPIOS DA PCA – 445
3.1.1. ROTAÇÃO POR ANÁLISE DE AUTOVALORES – 450
3.2. COMPONENTES PRINCIPAIS – 454
3.3. RELAÇÃO DE DISTÂNCIA COM PCA – 456
4. ANÁLISE DE ESCALA MULTIDIMENSIONAL (MDS) – 458
4.1. PRINCÍPIOS DA MDS – 458
4.2. ANÁLISE DE COORDENADAS PRINCIPAIS – 460
5. USO DE SOFTWARES EM ANÁLISE MULTIDIMENSIONAL – 468
6. REFERÊNCIAS – 473

10. Isoenzimas na Taxonomia e na Genética de Fungos
Jessie Ann Micales, Acelino Couto Alfenas e Morris R. Bonde

1. INTRODUÇÃO – 477
2. APLICAÇÕES DA ANÁLISE DE ISOENZIMAS – 478
2.1. DELIMITAÇÃO DE GRUPOS TAXONÔMICOS EM FUNGOS – 478
2.2. IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS – 481
2.3. VARIAÇÃO GENÉTICA – 483
2.4. IDENTIFICAÇÃO DE CRUZAMENTOS, HÍBRIDOS E LINHAGENS GENÉTICAS – 486
2.5. SEGREGAÇÃO E LIGAÇÃO DE LOCOS GÊNICOS – 487
2.6. DETERMINAÇÃO DA CONDIÇÃO NUCLEAR E DE CICLOS DE VIDA – 488
3. SELEÇÃO DE TECIDOS FÚNGICOS E PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS – 488
4. TÉCNICAS ELETROFORÉTICAS – 491
5. PROCEDIMENTOS DE COLORAÇÃO – 494
6. INTERPRETAÇÃO GENÉTICA DOS PADRÕES DE BANDAS – 494
6.1. MULTIALELISMO EM UM ÚNICO LOCO – 495
6.2. LOCOS MÚLTIPLOS – 496
6.3. ISOENZIMAS SECUNDÁRIAS – 497
7. NOMENCLATURA GÊNICA E APRESENTAÇÃO DE RESULTADOS – 498
8. REFERÊNCIAS – 502

11. Proteínas na Taxonomia e na Genética de Bactérias Fitopatogênicas
José Rogério de Oliveira e Marco Scortichini

1. INTRODUÇÃO – 513
2. APLICAÇÕES DA ELETROFORESE EM BACTERIOLOGIA DE PLANTAS – 514
2.1. AGROBACTERIUM – 514
2.2. ERWINIA – 516
2.3. PSEUDOMONAS E RALSTONIA – 517
2.4. XANTHOMONAS – 517
2.5. BACTÉRIAS CORINEFORMES – 518
3. CONSIDERAÇÕES FINAIS – 519
4. REFERÊNCIAS – 520

12. Isoenzimas na Taxonomia e na Genética de Nematóides Fitopatogênicos
Sandra Kunieda de Alonso e Acelino Couto Alfenas

1. INTRODUÇÃO – 525
2. O GÊNERO MELOIDOGYNE – 526
3. OS GÊNEROS HETERODERA E GLOBODERA – 529
4. ELETROFORESE DE PROTEÍNAS SOLÚVEIS TOTAIS E ISOENZIMAS – 531
4.1. FUNDAMENTOS – 531
4.2. APLICAÇÕES DA ANÁLISE DE PROTEÍNAS TOTAIS – 532
4.2.1. EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS SOLÚVEIS TOTAIS – 533
4.2.2. ELETROFORESE E COLORAÇÃO DO GEL – 533
4.3. APLICAÇÕES DA ELETROFORESE DE ISOENZIMAS – 533
4.3.1. EXTRAÇÃO DE ENZIMAS – 538
4.3.2. ELETROFORESE E COLORAÇÃO DO GEL PARA DETECÇÃO DE ENZIMAS – 539
5. REFERÊNCIAS – 540

13. Análise de Proteínas e Ácidos Nucléicos no Estudo de Vírus e Viróides Fitopatogênicos
André Dusi e Francisco Murilo Zerbini Júnior

1. INTRODUÇÃO – 545
2. ELETROFORESE – 549
2.1. ANÁLISE DA COMPOSIÇÃO QUÍMICA DA PARTÍCULA VIRAL – 549
2.2. PURIFICAÇÃO – 549
2.3. DIAGNOSE – 550
2.4. DIFERENCIAÇÃO DE ESTIRPES E ESTUDOS DE PROTEÇÃO CRUZADA – 552
3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 553
3.1. PURIFICAÇÃO E CONCENTRAÇÃO DE VÍRUS DE PLANTAS – 553
3.2. DESNATURAÇÃO DO CAPSÍDEO DE VÍRUS DE PLANTAS – 554
3.3. EXTRAÇÃO DE ÁCIDO NUCLÉICO PARA DETECÇÃO DE VIRÓIDES – 555
3.3.1. MÉTODO 1 – 555
3.3.2. MÉTODO 2 – 556
3.3.3. MÉTODO 3 – 557
3.4. ELETROFORESE – 558
3.4.1. ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA EM CONDIÇÕES NÃO-DESNATURANTES – 558
3.4.2. ELETROFORESE EM SDS-PAGE – 560
3.4.3. ELETROFORESE BIDIMENSIONAL – 560
3.4.4. ELETROFORESE REVERSA (R-PAGE) – 560
3.5. TÉCNICAS DE REVELAÇÃO DO GEL – 563
3.5.1. BROMETO DE ETÍDIO – 563
3.5.2. NITRATO DE PRATA – 563
4. CONSIDERAÇÕES FINAIS – 564
5. AGRADECIMENTO – 564
6. REFERÊNCIAS – 565

14. Eletroforese de Peptídios em Gel de Poliacrilamida
Maria Cristina Baracat-Pereira

1. INTRODUÇÃO – 567
2. ELETROFORESE DESCONTÍNUA COM TRICINA E SDS (SDS-TRICINA-PAGE) – 569
3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 573
3.1. PREPARO DAS AMOSTRAS PARA SDS-TRICINA-PAGE – 573
3.2. MATERIAL PARA SDS-TRICINA-PAGE – 575
3.3. ELETROFORESE EM SDS-TRICINA EM DUAS OU TRÊS FASES (16,5% T) – 575
3.3.1. SOLUÇÕES – 575
3.2.2. PREPARO DO GEL – 577
3.4. ELETROFORESE EM SDS-TRICINA EM TRÊS FASES (16,5% T OU 17% T) – 579
3.4.1. SOLUÇÕES – 579
3.4.2. PREPARO DO GEL – 581
3.5. DESENVOLVIMENTO DA CORRIDA – 583
3.6. REVELAÇÃO DO GEL CONTENDO PEPTÍDIOS – 584
3.7. INTERFERENTES – 585
4. LISTA DE ABREVIATURAS – 586
5. REFERÊNCIAS – 587

15. Eletroforese Aplicada à Análise Proteômica
Maria Cristina Baracat-Pereira

1. INTRODUÇÃO – 589
2. ETAPAS DA ANÁLISE PROTEÔMICA UTILIZANDO GEL 2D – 591
3. PREPARO DAS AMOSTRAS – 591
3.1. FUNÇÕES DOS ADITIVOS NO PREPARO DA AMOSTRA – 593
3.2. INTERFERENTES – 595
4. ELETROFORESE BIDIMENSIONAL (2D) – 596
4.1. PRIMEIRA DIMENSÃO: FOCALIZAÇÃO ISOELÉTRICA (IEF) – 597
4.1.1. MÉTODO DO ANFÓLITO CARREADOR – 597
4.1.2. MÉTODO DO GRADIENTE IMOBILIZADO DE pH (IPG) – 597
4.2. SEGUNDA DIMENSÃO: SDS-PAGE – 601
5. DETECÇÃO DOS SPOTS PROTÉICOS – 603
6. IDENTIFICAÇÃO DAS PROTEÍNAS – 606
7. SOLUÇÕES – 607
8. LISTA DE ABREVIATURAS – 610
9. REFERÊNCIAS – 611

ÍNDICE – 617

Editor: Acelino Couto Alfenas
Ano: 2006
Número de Páginas: 627
Tamanho: 17,5 x 24,5 cm
Editora: UFV
Acabamento: Brochura
ISBN: 85-7269-239-8